1、潜伏期结核诊断

      潜伏性感染者如不进行治疗，约有5%~10%会发展成活动性结核病，通过早期鉴别和预防性治疗可以有效低降低发病的风险。我国对潜伏期结核的诊断主要采用结核菌素试验（TST）和γ-干扰素释放试验（IGRAS）。

1.1 结核菌素试验

      凡感染过结核杆菌的抗体，会产生相应的致敏淋巴细胞，具有对结核杆菌的识别能力，当再次遇到通过皮肤注入的少量的结核菌素时，致敏T淋巴细胞受相同抗原再次刺激会产生局部炎症反应，出现红肿硬节即为阳性反应。

      此方法经济简便，对活动性结核的诊断灵敏度高达77%。但会对接种过卡介苗的人会产生假阳性反应。

1.2 γ-干扰素释放试验

       γ-干扰素释放试验（IGRAS）被认为是近十年来结核诊断史上取得的最重要成就， WHO推荐其用于潜伏期结核分枝杆菌感染诊断。目前较成熟的IGRAS检测试剂盒主要有结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）和QuantiFERON-TB Gold（QFT-G）。

      此方法不受卡介苗接种的影响，有较高的特异性和敏感性，结果可在24h之内获得，需时短，受主观因素影响相对小，但价格昂贵不适合大规模人群筛查。

               QuantiFERON-TB Gold

      Qiagen公司的QFT-G，是一款具有开创性意义的血液检测产品，相较于沿用了一百多年的结核菌素皮试检测，QFT已在全球多个国家和地区成为首选替代产品，广泛应用于结核菌感染筛查。

2、普通结核和耐药结核诊断

      对普通结核和耐药结核的诊断主要采用痰涂片检查、分离培养鉴定和药敏试验以及分子生物学实验如real-time PCR技术、基因组测序、德国HAIN公司的linear probe assay线性探针检测技术等。

2.1 痰涂片检查

      痰涂片显微镜检查是发现传染性肺结核患者最主要的方法。简单快速，成本效益高，2-4小时即可发报告，但敏感差、漏检率高，无法区分活菌和死菌。

萋尼染色法-红色-普通显微镜

荧光染色-黄或橘色-荧光显微镜

2.2 分离培养鉴定

      结核菌培养是目前诊断的金标准，分离培养与镜检方法结合，能够鉴定目标菌的活力程度，该特点在耐药检测并指导临床用药等方面具有重要作用。

传统培养法

      需要4~8周才能检测到结核菌的生长，而且阳性率只有30%~40%，特异性差，各种分枝杆菌均可生长。

分枝杆菌快速培养技术

      BD 公司BACTEC-MGIT 960系统和生物梅里埃公司BacT/ALTER 3D是分枝杆菌快速培养、药敏检测系统。该系统用于分枝杆菌快速培养，阳性率、阳性报告时间显著高于传统固体培养法，且自动化程度高、操作更为简单。

                                                   BacT/ALTER 3D                      BACTEC-MGIT 960

2.3 分子生物学鉴定

REPLI-g Single Cell

      分子生物学检测方法中，由于real-time PCR检测灵敏度高、快速并可避免外界污染，被用于检测结核杆菌，但传统的real-time PCR方法对阳性涂片的检出灵敏度高，对于阴性涂片的灵敏度则很低。

      Qiagen公司REPLT-g Single Cell Kit结合real-time PCR方法进行特异性检测是最理想的肺结核涂片阴性病人的诊断方法，前期通过REPLT-g Single Cell Kit获得高浓度的DNA，后期以此DNA为real-time PCR的扩增模板，特异性检测结核杆菌。此方法明显提高了肺结核涂片阴性病人的检出率，具有实验操作简单、易用性强、检测特异性和灵敏度高等特点。适合在实验室推广应用。

                                                    REPLI-g Single Cell Kit

Xpert MTB/RIF

      WHO推荐将Xpert MTB/RIF作为结核病及利福平耐药结核病的主要诊断工具，其特异性、敏感性、安全性及方便性均是结核病分子生物学诊断技术中的佼佼者

      GeneXpert是美国Cepheid开发的全自动一体化荧光定量PCR仪，与之配套专用的结核分枝杆菌检测试剂盒(Xpert MTB/RIF)，能在2小时内直接从病人新鲜痰液或冻存痰液中检测是否有结核分枝杆菌及利福平的耐药性，手动时间不超过5分钟，而且它将样品的超声破碎、核酸提取、样品扩增、实时检测融于一体，在密闭环境中进行对操作者和环境安全。

                                                                GeneXpert